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Jun 01, 2024

Stoffwechselneuverkabelung in MYC

Scientific Reports Band 13, Artikelnummer: 1273 (2023) Diesen Artikel zitieren 1284 Zugriffe 1 Details zu Altmetric Metrics Das Medulloblastom (MB) ist der häufigste bösartige Hirntumor bei Kindern.

Scientific Reports Band 13, Artikelnummer: 1273 (2023) Diesen Artikel zitieren

1284 Zugriffe

1 Altmetrisch

Details zu den Metriken

Das Medulloblastom (MB) ist der häufigste bösartige Hirntumor bei Kindern. Hochrisiko-MB-Patienten mit MYC-Amplifikation oder -Überexpression haben eine sehr schlechte Prognose. Eine fehlerhafte Aktivierung von MYC programmiert den Zellstoffwechsel deutlich um, um die Tumorentstehung aufrechtzuerhalten. Wie der Stoffwechsel bei MYC-gesteuerter MB gestört ist, ist jedoch nicht genau geklärt. Zunehmende Erkenntnisse belegen das Potenzial von BET-Bromodomänen-Inhibitoren (BETis) als Wirkstoffe der nächsten Generation zur Behandlung von MYC-bedingter MB. Ob und wie BETis jedoch den Metabolismus von Tumorzellen beeinflussen können, um ihre Antikrebsaktivitäten auszuüben, ist noch unbekannt. In dieser Studie untersuchen wir die Stoffwechselmerkmale, die MYC-gesteuerte MB charakterisieren, und untersuchen, wie diese durch die BET-Bromodomänen-Hemmung verändert werden. Zu diesem Zweck verwendeten wir einen NMR-basierten Metabolomics-Ansatz, der vor und nach der Behandlung mit BETi OTX-015 auf die MYC-gesteuerten Zelllinien MB D283 und D458 angewendet wurde. Wir fanden heraus, dass OTX-015 eine Stoffwechselverschiebung in beiden Zelllinien auslöst, die zu erhöhten Spiegeln von Myoinositol, Glycerophosphocholin, UDP-N-Acetylglucosamin, Glycin, Serin, Pantothenat und Phosphocholin führt. Darüber hinaus zeigen wir, dass OTX-015 den Ascorbat- und Aldarat-Metabolismus, den Inositolphosphat-Metabolismus, das Phosphatidylinositol-Signalsystem, den Glycerophospholipid-Metabolismus, den Ether-Lipid-Metabolismus, die Aminoacyl-tRNA-Biosynthese sowie die Stoffwechselwege von Glycin, Serin und Threonin in beiden Zelllinien verändert. Diese Erkenntnisse ermöglichen eine metabolische Charakterisierung von MYC-gesteuerten MB-Zelllinien im Kindesalter, die den Weg für die Entdeckung neuartiger medikamentöser Signalwege ebnen könnten. Wichtig ist, dass diese Ergebnisse auch dazu beitragen werden, die nachgelagerten Auswirkungen von BETis auf MYC-bedingte MB zu verstehen und möglicherweise die Entwicklung neuer Therapiestrategien zur Bekämpfung von Medulloblastomen zu unterstützen.

Das Medulloblastom (MB) ist der häufigste bösartige Tumor des Zentralnervensystems (ZNS) bei Kindern, der aus embryonalen Läsionen entsteht, die durch verschiedene Vorläuferzellpopulationen während der frühen Gehirnentwicklung erzeugt werden1,2. Es wurde erstmals 1926 als eine Untergruppe des Glioms3 beschrieben. Seitdem haben Fortschritte in der Molekulargenetik unser Verständnis von MB verbessert und zu einer Konsensdefinition von vier verschiedenen Gruppen geführt: Wingless (WNT), Sonic Hedgehog (SHH), Gruppe 3 und Gruppe 4, die sich sowohl in den molekularen als auch in den klinischen Merkmalen unterscheiden4,5 . Im Gegensatz zu den SHH- und WNT-Gruppen wurde bei Tumoren der Gruppen 3 und 4 kein gemeinsamer Signalweg identifiziert, der die Krankheit auslöst. Letztere weisen die schlechteste Prognose der vier Untergruppen auf und eine wiederkehrende MYC-Amplifikation oder -Überexpression wurde als einer der wichtigsten Biomarker für diese Hochrisiko-MB-Patientengruppe mit schlechtem klinischen Ergebnis identifiziert4. Das bescheidene Verständnis der molekularen Mechanismen, die der Tumorentstehung in MBs der Gruppen 3 und 4 zugrunde liegen, hat die Entwicklung gezielter Therapien eingeschränkt. Für Patienten mit mittlerem und hohem Risiko umfassen Studien neuartige Chemotherapeutika (Pemetrexed und Gemcitabin) nach Standard-Chemotherapie und risikoadaptierter Strahlentherapie. Für rezidivierende und refraktäre MB-Patienten kombinieren zwei Studien den Einsatz von Chemotherapeutika mit gezielten Wirkstoffen wie Prexasertib (NCT04023669), einem gezielten CHK1/2-Inhibitor, und Ribociclib (NCT01878617), einem Cyclin-abhängigen Kinase-Inhibitor6. Aktuelle Behandlungen umfassen Tumorresektion, Strahlentherapie und Chemotherapie. Trotz dieser aggressiven multimodalen Therapie sterben etwa 30 % der Patienten an einer Krankheit, während Überlebende aufgrund der harten Behandlungen am sich entwickelnden Gehirn unter langfristigen Nebenwirkungen leiden7,8.

Bisher deuten mehrere präklinische und klinische Studien darauf hin, dass BET-Bromodomänen (BRD)-Inhibitoren (BETis) als Wirkstoffe der nächsten Generation zur Behandlung von MYC-bedingtem MB4,6 in Betracht gezogen werden könnten. Hierbei handelt es sich um kleine Moleküle, die spezifisch Proteine ​​der BRD-Familie hemmen, die zwei Bromodomänen enthalten, die in der Lage sind, acetylierte Lysinreste in Histonschwänzen zu erkennen und Transkriptionsfaktoren zu rekrutieren, um die gezielte Gentranskription zu fördern9. Ihre Inhibitoren verhindern die Wechselwirkung zwischen der Bromodomäne und der Acetylgruppe und führen so zur Herunterregulierung bestimmter Gene, darunter c-MYC10. JQ1 war das erste BETi, das entwickelt wurde. Hierbei handelt es sich um ein zelldurchlässiges kleines Molekül, das die Differenzierung fördert und die Proliferation in Krebszelllinien und in verschiedenen murinen Tumormodellen stoppt10,11,12,13,14. Trotz seiner Wirksamkeit hat JQ1 aufgrund seiner Halbwertszeit von etwa einer Stunde nur kurze Wirkungsdauer, was die Möglichkeiten, präklinische Ergebnisse in klinischen Nutzen umzusetzen, stark einschränkt11,14,15. OTX-015 (MK-8628) ist ein im letzten Jahrzehnt entwickeltes BETi, das auf BRD 2/3/416 abzielt. OTX-015 wurde aus (+)-JQ1 synthetisiert, indem der tert-Butylester durch ein para-Hydroxyacetamid ersetzt wurde. Diese strukturelle Veränderung führte zu einem verbesserten pharmakokinetischen Profil17 (mit einer Halbwertszeit von 6 Stunden)16,18,19, was zu seiner Verwendung in mehreren klinischen Studien führte, darunter Glioblastoma multiforme (GBM), NUT-Mittellinienkarzinom und dreifach negativer Brustkrebs ( TNBC), kastrationsresistenter Prostatakrebs, duktales Pankreaskarzinom und hämatologische Malignome20. OTX-015 bewirkt eine frühe, starke und lang anhaltende Reduzierung von MYC, und aktive Dosen waren in vivo nicht toxisch16. Darüber hinaus wurde in GBM-Xenotransplantatmodellen gezeigt, dass diese Verbindung die Blut-Hirn-Schranke passiert und sich bevorzugt an Krebsgewebe bindet, was eine starke pharmakologische Grundlage für den Einsatz von OTX-015 in der Hirntumortherapie darstellt21. Darüber hinaus wurden kürzlich OTX-015-Prodrugs mit deutlich erhöhter Antitumoraktivität und verringerter Toxizität entwickelt22.

Der Transkriptionsfaktor c-MYC (MYC) gehört zur Familie der MYC-Proto-Onkoproteine, zu der auch MYCN und MYCL23 gehören. Die Heterodimerisierung mit MAX ist eine wesentliche Voraussetzung für die MYC-gesteuerte Transkription und zelluläre Transformation. Das MYC/MAX-Dimer bindet Enhancer-Box-Sequenzen (E-Box), die die Expressionsniveaus von Genen regulieren, die an wachstumsregulierenden Netzwerken und onkogenen Signalwegen, einschließlich Energieproduktion und Stoffwechsel, beteiligt sind23,24. Insbesondere aktiviert MYC Gene, die Stoffwechselprozesse modulieren, um Nährstoffangebot und -nachfrage auszugleichen und Entscheidungen über das Zellschicksal zu treffen25. Dies spielt eine entscheidende Rolle bei der Tumorentwicklung, da Krebszellen ihren Stoffwechsel umprogrammieren, um ihren erhöhten bioenergetischen Bedarf zu decken, eine hohe makromolekulare Biosyntheserate aufrechtzuerhalten, die für das Zellwachstum/die Zellteilung unerlässlich ist, und toxische Mengen an reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) zu verhindern26.

Trotz einer Vielzahl von Belegen, die belegen, dass MYC Stoffwechselnetzwerke optimiert, um die Onkogenese bei verschiedenen Tumorarten zu fördern27, sind die Daten bisher rar und begrenzt, und ebenso ist die metabolische Reaktion der BETi-Behandlung von MYC-bedingter MB noch unerforscht. In dieser Arbeit untersuchen wir Veränderungen im Stoffwechsel von MYC-gesteuerten MB-Zelllinien vor und nach der Behandlung mit OTX-015. Wir entschieden uns für OTX-015 gegenüber anderen Inhibitoren, z. B. JQ1, da es in klinischen Studien vielversprechender ist. Diese Studie trägt zur phänotypischen Charakterisierung von MYC-gesteuerten MB-Modellen bei und deckt durch OTX-015 verursachte Stoffwechselveränderungen auf, was neue Hinweise auf die Antikrebs-Wirkmechanismen dieser Verbindungen liefert.

Wir haben menschliche D283- und D458-MB-Zelllinien als In-vitro-Modelle für MYC-gesteuerte MB ausgewählt. Die D283-Zelllinie wurde entweder als Gruppe 3 oder Gruppe 4 klassifiziert und überexprimiert MYC und den Transkriptionsfaktor Orthodenticle Homeobox 2 (OTX2)28. Letzteres spielt eine Schlüsselrolle bei der Pathogenese der anaplastischen MB und die Behandlung mit All-Trans-Retinsäure führt zu einer Herunterregulierung von OTX2 und Apoptose29. D458-Zellen gehören zur Gruppe 3 und zeichnen sich durch MYC-Amplifikation aus. Sie stammen aus der Metastasierung eines Elterntumors und beherbergen Wildtyp-p5328 mit R72P-Polymorphismus, einem häufigen Einzelnukleotidpolymorphismus (SNP), der entweder zu einem Arginin oder Prolin an Position 72 des Proteins führt30,31.

Die D283- und D458-Zellen wurden 24 und 48 Stunden lang mit einer Reihe von OTX-015-Dosen von 0 bis 10 µM behandelt, um den optimalen Zeitpunkt für die Untersuchung ihres Stoffwechsels zu ermitteln. Zur Bewertung der MYC-Proteinexpression wurde eine Western-Blot-Analyse durchgeführt (Abb. 1A – C und ergänzende Abb. S1). Mithilfe des MTT-Assays haben wir gezeigt, dass OTX-015 die Lebensfähigkeit der Zellen nach 48 Stunden um 50 % verringert, während Western Blot zeigte, dass die c-MYC-Proteinspiegel bereits nach 24 Stunden Inkubation mit OTX-015 reduziert waren. Insbesondere zeigte die relative Proteinquantifizierung, dass 7,5 µM OTX-015 im Vergleich zu unbehandelten Zellen einen Rückgang der c-MYC-Proteinspiegel um 70 % verursachten. Wir haben uns daher entschieden, die frühen Auswirkungen der BET-Hemmung und der Herunterregulierung von MYC auf den Krebsstoffwechsel nach 24-stündiger Inkubation mit 7,5 µM OTX-015 zu untersuchen.

OTX-015 hemmt die Lebensfähigkeit der D458- und D283-MB-Zelllinien. D458 (rot) und D283 (schwarz) wurden mit unterschiedlichen Konzentrationen von OTX-015 im Bereich von 0 bis 10 µM behandelt, wie für (A) 24 und (B) 48 Stunden angegeben. Die statistische Signifikanz der Hemmung der Zelllebensfähigkeit wurde mithilfe einer einfaktoriellen ANOVA mit ** ermittelt; *** und **** geben p < 0,05, < 0,005 bzw. < 0,0001 an. (C) Repräsentativer Western-Blot, der die Herunterregulierung von MYC nach Behandlung mit OTX-015 (2,5, 5,0, 7,5 und 10,0 µM) für 24 Stunden zeigt. Fett gedruckte Zahlen geben die prozentuale Reduktion von normalisiertem c-MYC (c-MYC/β-Actin) gegenüber der Kontrolle (DMSO) an. Original-Western-Blots sind in der ergänzenden Abbildung 1 dargestellt.

Als nächstes analysierten wir den Metabolismus von D283- und D458-Zellen nach OTX-015-Behandlung mittels Kernspinresonanzspektroskopie (NMR). Die 1H-NMR-Profilierung der wässrigen Zellextrakte ermöglichte die Identifizierung von 41 intrazellulären polaren Metaboliten (Abb. 2, ergänzende Abbildungen S2–S7 und ergänzende Tabelle S1), die durch den Vergleich chemischer Spitzenverschiebungen, J-Kopplungen und Multiplett-Intensitätsverhältnisse mit NMR zugeordnet wurden spektrale Resonanzmuster, die in der Human Metabolome Database (HMDB)32 und der Biological Magnetic Resonance Database (BMRB)33 verfügbar sind. Die Metabolitenzuordnung wurde durch einen 2D-NMR-Ansatz bestätigt, bei dem [1H–1H] TOCSY- und [1H–13C] HSQC-Experimente durchgeführt wurden (Ergänzende Abbildungen S8–S10). Ausgerichtete und normalisierte 1D-1H-NMR-Spektrenüberlagerungen des aliphatischen und aromatischen Bereichs von D283 gegenüber D458, mit OTX-015 behandeltem D283 (D283_OTX) gegenüber der D283-Kontrolle (D283_Ctrl) und mit OTX-015 behandeltem D458 (D458_OTX) gegenüber der D458-Kontrolle (D458_Ctrl). ) (Abb. 2 und ergänzende Abbildungen S2 – S7) zeigen Intensitätsunterschiede für viele Metabolitenpeaks, deren chemische Verschiebungswerte in der Ergänzungstabelle S1 angegeben sind. Unter diesen haben wir Folgendes entdeckt: Derivate des Glykolyse- und Tricarbonsäurezyklus (TCA), einschließlich Laktat, Acetat, Alanin, Succinat, Zitronensäure, Pyruvat, Glucose und Fumarat; Glutamin und Glutaminderivate, umfassend Glutamat-N-acetylaspartat und Prolin; andere Aminosäuren wie Leucin, Isoleucin, Valin, Phenylalanin, Threonin, Tyrosin, Glycin, Serin und Histidin; Aminosäurederivate, einschließlich reduziertem Glutathion GSH, Kreatin, Taurin, Hypotaurin und Formiat; Phospholipid-Derivate, einschließlich Phosphocholin und Glycerophosphocholin; Nukleotide wie ATP, UDP, CTP und NAD; das Kohlenhydrat Myo-Inositol und sein Stereoisomer Scyllo-Inositol; das Polyamin Putrescein und das Vitamin B5 Pantothenat. Darüber hinaus wurde beobachtet, dass sich zwei phosphorylierte Zucker bei der Behandlung mit OTX-015 veränderten. Einer davon wurde aufgrund der chemischen Verschiebung des anomeren Protons als UDP-N-Acetylglucosamin identifiziert, während der andere als generischer „UDP-Zucker“ bezeichnet wurde, da die eindeutige Zuordnung seiner Struktur allein anhand unserer NMR-Daten nicht möglich war .

Ausgerichtete und normalisierte Überlagerungen repräsentativer eindimensionaler 600-MHz-1H-NMR-Spektren von Zellextrakten aus Kontroll- und OTX-015-behandelten Zellen mit Schwerpunkt auf aliphatischen und aromatischen Regionen. (A) D283 (D283_Strg, grün) versus D458 (D458_Strg, blau); (B) D283-Kontrolle (D283_Strg, grün) im Vergleich zu mit OTX-015 behandelten (D283_OTX, schwarz) und (C) D458-Kontrolle (D458_Strg, blau) im Vergleich zu mit OTX-015 behandelten (D458_OTX, rot) Zelllinien. Ausgewählte Peaks identifizierter Metaboliten sind gekennzeichnet.

1D-1H-NMR-Spektren wurden verwendet, um eine partielle Diskriminanzanalyse der kleinsten Quadrate (PLS-DA) durchzuführen, eine überwachte multivariate statistische Analyse, die ein leistungsstarkes Werkzeug für die Durchführung groß angelegter Metabolomics-Studien darstellt34. Das PLS-DA-Score-Streudiagramm zeigt, dass das Metabolom der D283- und D458-Zelllinien statistisch unterschiedlich ist, wobei Komponente 1 und Komponente 2 mit einer Varianz von 46,4 % bzw. 12 % für die Gruppentrennung verantwortlich sind (Abb. 3A). Bemerkenswert ist, dass bei der Behandlung mit OTX-015 in beiden Zelllinien eine deutliche Veränderung des Metaboloms erkennbar ist, da D283_OTX und D458_OTX im Vergleich zu ihren jeweiligen Kontrollen (D283_Ctrl und D458_Ctrl) entlang der Komponente 2 verschoben sind. Um anschließend die Metaboliten zu identifizieren, die zur beobachteten PLS-DA-Trennung beitragen, wurden für den NMR-Datensatz variable Wichtigkeitswerte in der Projektion (VIP) ermittelt (Abb. 3B). VIP-Scores ˃1 deuten darauf hin, dass unterschiedliche Konzentrationen von Glycin, Taurin, Myo-Inositol, Glutamat, Kreatin und N-Acetylaspartat stark mit der Trennung von D283- und D458-Zellen zusammenhängen, wohingegen erhöhte Myo-Inositol- und Taurin-Werte und verringerte Glycin-Werte stark mit der Trennung von D283- und D458-Zellen zusammenhängen. Glutamat und N-Acetylaspartat bestimmen die PLS-DA-Trennung zwischen Behandlung und Kontrollen.

(A) Score-Streudiagramm, das die PLS-DA-Analyse der vollständigen Spektren der 1H-NMR-Daten zeigt, wobei die Spitzenintensitäten der Metaboliten die Variablen darstellen. Die räumliche Verteilung der Proben basiert auf dem Metabolitenmuster. Für diese Analyse wurden sechs biologische Replikate verwendet. (B) Der VIP-Score (Variable Wichtigkeit der Projektion) wurde für die Metaboliten aufgetragen, die signifikant zur Trennung durch PLS-DA beitrugen (VIP ˃ 1).

Eine Heatmap, die eine quantitative gezielte Analyse darstellt, bestätigte wichtige Stoffwechselunterschiede zwischen den durch PLS-DA identifizierten Gruppen (Abb. 4A). Die einfaktorielle Varianzanalyse (ANOVA) für diese Metabolitenquantifizierung ist in Tabelle 1 dargestellt. Die LSD (Least Significant Difference) nach Fisher zeigt an, dass D283 und D458 durch unterschiedliche Mengen an Aminosäuren und Derivaten (N-Acetylaspartat, Taurin, Hypotaurin, Tyrosin, Glycin, Phenylalanin, Serin, Leucin, Isoleucin, Valin, Alanin, GSH, Glutamat und Threonin); Kohlenhydrate (Myo-Inositol, Scyllo-Inositol, UDP-N-Acetylglucosamin und UDP-Zucker); Phospholipid-Derivate (Phosphocholin und Glycerophosphocholin); Nukleotide (NAD und CTP); das Polyamin Putrescein und das Vitamin B5 Pantothenat.

(A) Heatmap, die die Metabolitenquantifizierung (Log2-fache Änderungswerte) in den Zelllinien D283 im Vergleich zu D458, D283_OTX im Vergleich zu D283_Ctrl und D458_OTX im Vergleich zu D458_Ctrl zeigt. Metaboliten wurden mit MATLAB anhand der Intensität des Metabolitensignals im 1H-NMR-Spektrum quantifiziert und unter Verwendung eines internen Standards (n = 6) berechnet. (B,C) Kästchen, die Metaboliten darstellen, die in D283_OTX gegenüber D283_Ctrl und D458_OTX gegenüber D458_Ctrl häufig dereguliert und in beiden Vergleichen (B) oder zumindest in einem von ihnen (C) statistisch signifikant sind. Die statistische Analyse wurde unter Verwendung einer Einweg-ANOVA durchgeführt (siehe Ergänzungstabelle 1).

Bei der Behandlung mit OTX-015 wurde eine metabolische Reaktion sowohl in den Zelllinien D283 als auch D458 festgestellt und interessanterweise scheinen einige Metaboliten allgemein reguliert zu sein. Dazu gehören Myoinositol, Glycerophosphocholin, Serin, Pantothenat, UDP-N-Acetylglucosamin, Phosphocholin und Glycin, die alle nach der Behandlung sowohl in D283 als auch in D458 anstiegen (Abb. 4B–D). Bemerkenswert ist, dass die Behandlung mit OTX-015 zusätzliche Veränderungen im endogenen Metabolom von D283 und D458 hervorrief, obwohl sich die spezifischen Veränderungen zwischen den beiden Zelllinien unterscheiden (Abb. 4A und ergänzende Abb. S11).

Um zu verstehen, wie sich die durch die OTX-015-Behandlung verursachte metabolische Neuverdrahtung auf funktionelle Signalwege auswirkt, haben wir mithilfe der webbasierten Plattform eine Metaboliten-Set-Anreicherungsanalyse (MSEA) an quantifizierten Metaboliten (beschrieben in Tabelle 1) zusammen mit ihren relativen Konzentrationen durchgeführt MetaboAnalyst35 (Abb. 5). Die 25 wichtigsten Signalwege, die im Vergleich zu unbehandelten Kontrollzellen und D458_OTX im Vergleich zu unbehandelten Kontrollzellen signifikant an D283_OTX angereichert sind, sind in Abb. 5A, B dargestellt. Wir konzentrierten uns auf die gemeinsamen angereicherten Wege, bei denen die Metaboliten Myoinositol, Glycerophosphocholin und Serin bei der Behandlung mit OTX-015 in beiden Zelllinien signifikant anstiegen (Abb. 5).

Zusammenfassendes Diagramm der Metabolitensatz-Anreicherungsanalyse (MSEA) der identifizierten Metaboliten in (A) D283_OTX gegenüber D283_Ctrl und (B) D458_OTX gegenüber D458_Ctrl. Horizontale Diagrammbalken zeigen die Pfade an, die in diesen Gruppen angereichert sind. Der Farbcode entspricht dem berechneten p-Wert. Vertikale rote Linien zeigen Pfade mit einem p-Wert < 0,05 an. (C) Eine zusammenfassende Tabelle der Wege, die bei der OTX-015-Behandlung häufig in beiden Zelllinien angereichert sind und einen p-Wert < 0,05 aufweisen, wird angezeigt.

Diese Daten bestätigen, dass OTX-015 eine unterschiedliche metabolische Umprogrammierung in D283- und D458-MB-Zelllinien auslöst, was deren unterschiedlichen Grundstoffwechsel widerspiegelt. Nichtsdestotrotz beeinflusst OTX-015 in beiden Zelllinien den Ascorbat- und Aldaratstoffwechsel, den Inositolphosphatstoffwechsel, das Phosphatidylinositol-Signalsystem, den Etherlipidstoffwechsel, den Glycerophospholipidstoffwechsel, den Glycin-Serin- und Threonin-Stoffwechsel und die Aminoacyl-tRNA-Biosynthese (Abb. 5C).

MYC-bedingter MB ist ein aggressiver, weit verbreiteter pädiatrischer Tumor, der auf eine intensive multimodale Therapie nicht anspricht4,36. In diesem Szenario erweisen sich BETis aufgrund ihrer Fähigkeit, die MYC-Expression zu beeinträchtigen und die epigenetische Maschinerie von Krebszellen zu modulieren, als vielversprechende Wirkstoffe bei MYC-abhängigem MB sowie bei anderen Tumoren. In dieser Arbeit untersuchten wir die Wirkung von BETi OTX-015 auf den Stoffwechsel der D283- und D458-MYC-gesteuerten MB-Zelllinien für Kinder. OTX-015 wurde aus dem herkömmlichen BETi JQ1 entwickelt, um sein pharmakokinetisches Profil und damit sein Potenzial für die klinische Anwendung zu verbessern16,17,22.

Es ist bereits bekannt, dass MYC den Stoffwechsel reguliert, der wiederum den MYC-Spiegel steuert27. MYC fördert die Zellproliferation und induziert aufgrund des erhöhten anabolen Bedarfs Stoffwechselveränderungen. Andererseits ist MYC auch mehreren Kontrollmechanismen nachgeschaltet, die durch Nährstoffspiegel und metabolischen Stress reguliert werden27. Trotz der bekannten Wechselwirkung zwischen MYC und dem Stoffwechsel bei Krebs ist immer noch unbekannt, wie der Stoffwechsel bei MYC-gesteuerter MB dereguliert wird. Obwohl bekannt ist, dass die Hemmung von BRD-Proteinen eine metabolische Neuprogrammierung verursacht37,38, ist nicht geklärt, ob BETi-abhängige Stoffwechselveränderungen zur Überwachung der Arzneimittelreaktion auf BETis verwendet werden können. Hier untersuchten wir das Metabolom von MYC-gesteuerten MB-Zellmodellen und fragten, wie OTX-015 ihren metabolischen Phänotyp mithilfe eines NMR-basierten Ansatzes modulieren würde. Die NMR-Spektroskopie hat sich als genaue und quantitative Methode zur Untersuchung krankheitsbedingter Stoffwechselveränderungen durch die Erkennung von Stoffwechselsignaturen zur Frühdiagnose und Prognosebewertung, die Aufdeckung zellulärer Mechanismen sowie die Entdeckung pharmakologischer Wirkungen und potenzieller therapeutischer Bedeutung von Arzneimittelverbindungen als äußerst wertvoll erwiesen39,40 ,41.

In dieser Arbeit haben wir herausgefunden, dass D283 im Vergleich zu D458-Zellen unterschiedliche Stoffwechseleigenschaften aufweist, was mit ihrer unterschiedlichen Herkunft und ihrem genetischen Hintergrund übereinstimmt28. Die bedeutendsten unterschiedlichen Metaboliten zwischen den beiden Zelllinien waren: Aminosäuren und ihre Derivate wie Hypotaurin und GSH; der TCA-Zyklus-Metabolit Zitronensäure; die Phospholipid-Derivate Phosphocholin und Glycerin-Phosphocholin; das Vitamin B5-Pantothenat; NAD und Scylloinositol. Bei der Behandlung von D283 und D458 mit OTX-015 zeigten sich neben zellspezifischen Stoffwechselveränderungen auch gemeinsame Merkmale. In beiden Zelllinien zeigten quantitative NMR-Daten einen Anstieg von Myo-Inositol, einem Metaboliten, der bekanntermaßen die Osmoregulation der Zellen steuert und dessen Rolle in pathophysiologischen Zusammenhängen gewebe- und tumorabhängig ist42. Myo-Inositol zielt insbesondere auf kritische Krebsrisiken43,44,45 ab, indem es: (i) die pRB-Phosphorylierung hemmt und anschließend den Zellzyklus blockiert; (ii) Reduzierung von PI3K, Akt, ERK und NF-kB und (iii) Beeinträchtigung der Invasivität43,44,45. Der beobachtete Anstieg der Myo-Inositol-Spiegel könnte daher zur antiproliferativen Wirkung beitragen, die bei der Behandlung mit OTX-015 in den Zelllinien D283 und D458 beobachtet wird.

Die Metabolite-Set-Anreicherungsanalyse (MSEA) ergab, dass die Behandlung mit OTX-015 eine deutliche allgemeine Anreicherung in Stoffwechselwegen verursacht, an denen Myo-Inositol beteiligt ist (Anreicherungsverhältnis ˃8). Dazu gehören der Ascorbat- und Aldarat-Metabolismus, der Inositolphosphat-Metabolismus und die Signalwege des Phosphatidylinositol-Signalsystems in beiden Zelllinien. Nach unserem Kenntnisstand wurde der Ascorbat- und Aldarat-Stoffwechsel bisher noch nie mit MB in Verbindung gebracht, obwohl beschrieben wurde, dass er bei anderen Krebsarten deutlich verändert ist46. Insbesondere sind sowohl Ascorbat (AA) als auch seine oxidierte Form Dehydroascorbat (DHA), die zusammen die beiden bestehenden Redoxzustände von Vitamin C darstellen, wichtig für die Nervenfunktion und das Gleichgewicht zwischen Antioxidantien und Oxidationsmitteln47. Tatsächlich induzieren abweichende DHA-Dosen oxidative Effekte, die selektiv Krebszellen abtöten48. In Übereinstimmung mit früheren Arbeiten49 deuten unsere Ergebnisse darauf hin, dass OTX-015 und möglicherweise andere BETis über die Herunterregulierung von MYC hinaus ihre Antitumorfähigkeiten entfalten könnten, indem sie das metabolische Gleichgewicht zwischen Antioxidantien und ROS stören, was letztendlich zum Tod von Krebszellen führen könnte.

Unsere Daten zeigen auch, dass der Inositolphosphatstoffwechsel und die Signalwege des Phosphatidylinositol-Signalsystems mit der Behandlung mit OTX-015 verbunden sind. Es ist bekannt, dass diese beiden Wege durch die Stimulation von Phospholipase C initiiert werden, die Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphat in die intrazellulären sekundären Botenstoffe 1,2-Diacylglycerin (DAG) und Inositol-1,4,5-trisphosphat (IP3) umwandelt50. DAG aktiviert die Proteinkinase C, während IP3 das zelluläre Kalzium reguliert, und beide können in polarere Inositolphosphate (IPs) und Diphosphorylinositolphosphate (PP-IPs) umgewandelt werden. Inositole, von denen das am häufigsten vorkommende Stereoisomer Myo-Inositol51 ist, spielen eine entscheidende Rolle bei mehreren biologischen Funktionen und eine Deregulierung ihrer Synthese wurde mit Krankheiten wie Krebs in Verbindung gebracht43,44. IPs und PP-IPs spielen eine Schlüsselrolle bei der Transkriptionskontrolle, dem mRNA-Export und der DNA-Reparatur und sind auch wichtig für die Glukoseerkennung in β-Pankreaszellen52. Wie oben erwähnt, können Inositole die onkogene Signalübertragung über verschiedene Mechanismen beeinträchtigen, einschließlich der Hemmung des PI3K/Akt-Signalwegs43. Bemerkenswert ist, dass dies beim Medulloblastom bereits als einer der relevanten onkogenen Signalwege erkannt wurde, die zur Krankheit beitragen53, und dementsprechend wurde ein selektiver Pan-Klasse-I-PI3K-Inhibitor, nämlich BKM120, als potenzielle neue Therapie für MB54 entdeckt. Daher kann die Behandlung mit OTX-015 in unseren MYC-gesteuerten Zellmodellen die Myo-Inositol-Produktion hochregulieren, der PI3K/Akt/mTOR-Signalisierung entgegenwirken und schließlich den Tod von Tumorzellen auslösen.

Unsere NMR-Analyse ergab höhere Konzentrationen von Glycerophosphocholin und Phosphocholin bei der Behandlung mit OTX-015. Der Anstieg dieser Metaboliten steht in engem Zusammenhang mit der bekannten Ansammlung von Lipidtröpfchen55,56. Frühere Arbeiten haben gezeigt, dass die MYC-Hemmung, die entweder mit dem c-MYC/Max-Inhibitor 10058-F4 oder durch MYC-Depletion erreicht wird, eine mitochondriale Dysfunktion und eine Beeinträchtigung der Oxidation von β-Fettsäuren auslöst, was schließlich zur Ansammlung intrazellulärer Lipidtröpfchen führt57,58. Bemerkenswert ist auch, dass die BRD4-Hemmung nachweislich die OXPHOS-Kapazität reguliert und den Stoffwechsel in mutierten Cybridzellen des Komplexes I (CI) neu verdrahtet37. In Übereinstimmung damit scheinen unsere Daten darauf hinzudeuten, dass einer der mutmaßlichen Antikrebsmechanismen von OTX-015 die Mitochondrienfunktion behindern könnte, was zu einem ineffizienten Lipidkatabolismus und erhöhten Spiegeln von Glycerophosphocholin und Phosphocholin führen würde. Es sind jedoch weitere Experimente erforderlich, um die faszinierende Möglichkeit eines Zusammenspiels zwischen BETis, der mitochondrialen Maschinerie und dem Lipidstoffwechsel bei MYC-gesteuerter MB zu untersuchen.

In Übereinstimmung mit den erhöhten Glycerophosphocholinspiegeln ergab unsere MSEA-Analyse, dass OTX-015 auch eine gemeinsame Anreicherung zweier miteinander verflochtener Stoffwechselwege verursacht, an denen dieser Metabolit beteiligt ist, insbesondere der Ether-Lipid-Metabolismus und der Glycerophospholipid-Metabolismus. Obwohl über unterschiedliche Rollen dieser Signalwege bei Krebs berichtet wurde59,60,61,62, fungieren bestimmte Arten von Etherlipiden als endogene Antioxidantien und sind an der Zelldifferenzierung beteiligt63, während festgestellt wurde, dass Glycerophospholipide in Gliom-Stammzellen vermindert sind64. Veränderungen in diesen beiden Signalwegen können daher einen Einfluss auf den Grad der Zelldifferenzierung von MYC-gesteuerter MB haben.

Bei der Behandlung mit OTX-015 stellten wir außerdem einen signifikanten Konzentrationsanstieg von Serin in beiden Zelllinien fest. Diese Aminosäure wird aus dem glykolytischen Zwischenprodukt 3-Phosphoglycerat synthetisiert und kann in Glycin umgewandelt werden, das wiederum in Prozessen des Kohlenstoffstoffwechsels verwendet wird, um die Synthese makromolekularer Bausteine ​​wie Purine aufrechtzuerhalten und/oder für die GSH-Synthese, um ROS entgegenzuwirken Effekte65. Wichtig ist, dass die Serin-Glycin-Umwandlung durch die Serin-Hydroxymethyltransferase (SHMT) katalysiert wird, von der bekannt ist, dass sowohl die zytoplasmatische (SHMT1) als auch die mitochondriale (SHMT2) Isoform durch MYC66 hochreguliert werden. Daher könnten wir spekulieren, dass die durch OTX-015 verursachte Herunterregulierung von MYC die SHMT1/2-Aktivität beeinträchtigt, was zu einer Serinakkumulation führt. In Übereinstimmung damit stellten wir auch eine gleichzeitige Verringerung des Glycins in beiden Zelllinien fest und zeigten, dass ein häufig betroffener Signalweg nach der Behandlung mit OTX-015 der Glycin-, Serin- und Threonin-Metabolismus ist. Wichtig ist, dass Glycin eine Vorstufe von Purinen und somit ein wichtiger Metabolit für sich schnell vermehrende Krebszellen ist67. Dementsprechend ergab eine aktuelle Studie, dass der Glycinspiegel in MYC-amplifiziertem MB im Vergleich zum normalen Kleinhirn erhöht ist68.

Ein weiterer Signalweg, der in beiden Zelllinien als Reaktion auf die Behandlung mit OTX-015 beeinflusst wird, ist die AminoacyltRNA-Biosynthese. Zur Unterstützung unserer Ergebnisse wurde insbesondere berichtet, dass die AminoacyltRNA-Biosynthese eine Signalwegsignatur für MB-Tumoren der Gruppe 3γ ist, die durch eine erhöhte MYC-Kopienzahl und eine negative Prognose gekennzeichnet ist69. AminoacyltRNA-Synthasen sind Schlüsselenzyme in der Proteinsynthese, die im Laufe der Evolution weitere Domänen erworben haben, die diesen Enzymen über die Translation hinaus zusätzliche Rollen verliehen. Die Hochregulierung der Seryl-tRNA-Synthetase induzierte zelluläre Seneszenz und hemmte das Wachstum von Gebärmutterhalstumor-Xenotransplantaten bei Mäusen, indem sie die Seneszenz von Tumorzellen verursachte70,71. Wir fanden heraus, dass mit OTX-015 behandelte MYC-gesteuerte MB-Zellen im Vergleich zu unbehandelten Zellen deutlich höhere Serinspiegel aufweisen, was mit einer Hochregulierung der Seryl-tRNA-Synthetase70 vereinbar ist. OTX-015 könnte daher die Seneszenz fördern, indem es die Biosynthese der Seryl-tRNA-Synthetase steigert, obwohl ein Zusammenhang zwischen OTX-015 und der Biosynthese der Seryl-tRNA noch bewiesen werden muss.

Zusammenfassend beschreiben wir in dieser Arbeit das Stoffwechselprofil von MYC-gesteuerten MB-Zellmodellen und zeigen wichtige Stoffwechselveränderungen auf, die durch die Behandlung mit OTX-015 ausgelöst werden und entweder MYC-abhängig oder -unabhängig sein können. Diese neuen Erkenntnisse tragen zur phänotypischen Charakterisierung von MYC-gesteuerter MB bei und könnten den Grundstein für die Entdeckung neuer medikamentöser Signalwege legen, die über die MYC-Hemmung hinausgehen. Unsere Analyse zeigte insbesondere, wie OTX-015 den Stoffwechsel von MYC-gesteuerten MB-Zellmodellen verändern konnte. Dies liefert wichtige zusätzliche Informationen über mögliche Wirkungsmechanismen, die diese Verbindung auf zellulärer Ebene hervorruft, um das Wachstum anfälliger Krebszellen zu hemmen, und liefert gleichzeitig potenziell nützliche Hinweise für den Einsatz von BETis bei der Behandlung von Medulloblastomen. Diese erste metabolische Charakterisierung wird wahrscheinlich weitere Analysen fördern, leiten und den Weg ebnen, die wahrscheinlich zusätzliche metabolische Merkmale und mögliche Auswirkungen für die Medulloblastom-Behandlung mit OTX-015 oder anderen BETis aufdecken werden.

Die Zelllinien D283 und D458 wurden freundlicherweise von außerordentlichem Professor JI Johnsen (Karolinska Institutet, Stockholm, Schweden) zur Verfügung gestellt. Die Zellen wurden in DMEM gehalten, ergänzt mit 10 % hitzeinaktiviertem fötalem Rinderserum (FBS) (Life Technologies, Waltham, MA, USA), 10 mM Hepes, 2 mM L-Glutamin, 100 IU/ml Penicillin G und 100 μg/ml. ml Streptomycin Sigma, St. Louis, MO, USA) bei 37 °C in einer angefeuchteten 5 % CO2-Atmosphäre.

Ganzzelllysate wurden unter Verwendung von RIPA-Puffer (Sigma-Aldrich), ergänzt mit einer Halt-Protease- und Phosphatase-Inhibitor-Mischung (Thermo Scientific), hergestellt. Die Proben wurden auf SDS/PAGE aufgelöst und auf Polyvinylidenfluorid (PVDF)-Membranen (BioRad, 1704156) übertragen. Der c-Myc-Antikörper (9E10) (NB600-302, Novus Biologicals Bio-Techne, Vereinigtes Königreich 1:2000) wurde zur Identifizierung von c-MYC verwendet, während Anti-β-Actin (Santa Cruz, SC47778 1:10.000) verwendet wurde als Ladekontrolle. HRP-konjugierte Sekundärantikörper stammten von GE Healthcare. Die Banden wurden mit dem Chemilumineszenzsubstrat SuperSignal West Dura (Thermo Fisher Scientific, 34075) nachgewiesen und Bilder wurden in einem ChemiDoc XRS + (BioRad) aufgenommen. Die Bildverarbeitung wurde mit ImageLab (Life Science Research, BioRad) durchgeführt. Alle Western-Blot-Daten sind das Ergebnis von drei unabhängigen biologischen Replikaten. Die Quantifizierung erfolgte durch Normalisierung auf β-Actin und der Prozentsatz der Abnahme von c-MYC in behandelten Zellen im Vergleich zu Kontrollzellen wurde berechnet.

Die Lebensfähigkeit der Zellen wurde durch einen 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid (MTT)-Reduktionstest (Sigma-Aldrich) bewertet. Die Zellen wurden in 96-Well-Platten mit einer Dichte von 135.000 Zellen/ml ausgesät. Vierundzwanzig Stunden nach der Aussaat wurde dem Medium entweder Arzneimittel (OTX-015, Sigma-Aldrich) oder Vehikel (DMSO, Sigma-Aldrich) zugesetzt. Nach 48 Stunden wurden 10 μl MTT-Lösung 5 mg/ml (Sigma-Aldrich) in jede Vertiefung gegeben. Zwei Stunden später wurde MTT unter Zugabe von 10 % 0,01 M HCl SDS gelöst und über Nacht inkubiert. Am nächsten Tag wurde die Absorption bei 570 nm mit einem Mikroplatten-Lesegerät (SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader, Molecular Devices) gemessen. Die Experimente wurden mindestens dreimal wiederholt und die Lebensfähigkeit wurde auf den Mittelwert der unbehandelten Kontrolle normalisiert, der auf 100 % Lebensfähigkeit gesetzt wurde.

Die Zellen wurden mit einer Dichte von 5 × 106 Zellen/ml in 150-mm-Schalen ausgesät und am nächsten Tag mit 7,5 µM OTX-015 inkubiert. Nach 24 Stunden wurden die Zellen in einem 50-ml-Falcon-Röhrchen gesammelt, 30 Sekunden lang in ein Trockeneis/Ethanol-Bad getaucht und dann 5 Minuten lang bei +4 °C und 200 g zentrifugiert. Die Medien wurden verworfen und das Pellet durch Zugabe von 2,0 ml –20 °C kaltem MeOH suspendiert. Anschließend wurden 2 ml eiskaltes CH3Cl und MilliQ H2O zugegeben und die Lösung durch Umdrehen gemischt und 10 Minuten auf Eis inkubiert, um die Bildung einer stabilen Doppelschicht zu ermöglichen. Anschließend wurden die Proben 45 Minuten lang bei +4 °C und 300 g zentrifugiert, um die obere wässrige Schicht von der unteren organischen Schicht zu trennen, die in der polaren bzw. apolaren Fraktion lösliche Metaboliten enthielt. Die polare Fraktion wurde in einem Eppendorf-Konzentrator (Concentrator plus, Eppendorf) getrocknet und per NMR analysiert.

Vor NMR-Experimenten wurden die Proben in einem 90/10 H2O/D2O-Puffer mit 100 mM Na2HPO4, 5 mM Trimethylsilylpropansäure (TSP) und 4 mM NaN3 resuspendiert. Die NMR-Spektroskopie wurde mit einem Bruker Avance NEO 600 MHz NMR-Spektrometer durchgeführt, das mit einem TCI CryoProbe Prodigy (Bruker) ausgestattet war. Die Spektren wurden bei 298 K aufgenommen und bestanden für jede Probe aus einem 1D-1H-PURGE-Spektrum72, das dann phasenkorrigiert und grundlinienkorrigiert wurde. Die chemischen Verschiebungen wurden auf den TSP-Peak bei 0,0 ppm bezogen.

Die Spektren wurden dann mithilfe einer von A. Edison und Mitarbeitern73 geschriebenen Toolbox nach MATLAB exportiert. Die Spektren wurden mit der Pearson PAFFT-Methode (Peakausrichtung durch schnelle Fourier-Transformation) ausgerichtet und dann durch probabilistische Quotientennormalisierung (PQN) normalisiert.

Für diese Analyse wurden sechs biologische Replikate verwendet.

An einer der Proben wurden zu Identifikationszwecken 2D-Spektren verwendet, bestehend aus einem Total Correlation SpectroscopY ([1H–1H] TOCSY) unter Verwendung der Bruker-Pulssequenz „dipsi2gpphzs“, leicht modifiziert, um Vorsättigung einzubeziehen, mit acht Scans, 256 t1-Inkremente , eine spektrale Breite von 13,7 ppm in beiden Dimensionen und eine Relaxationsverzögerung von 2 s, zusammen mit einem heteronuklearen Einzelquantenkorrelationsspektrum (([1H–13C] HSQC) unter Verwendung der Bruker-Pulssequenz „hsqcetgpsisp“ mit 16 Scans, 256 t1-Inkremente, eine spektrale Breite von 170 ppm in der 13C-Dimension und 12 ppm in der 1H-Dimension sowie eine Relaxationszeit von 2 s. Metaboliten wurden anhand von Informationen aus der menschlichen Metabolomdatenbank (HMDB)32 und der biologischen Magnetresonanz zugeordnet Datenbank (BMRB)33. Die relative Quantifizierung von Metaboliten wurde durch Integration von Peaks zur Berechnung der Peakfläche erreicht, die proportional zur Anzahl der Kerne ist, die das Signal hervorrufen. Für jeden Metaboliten wurden Mittelwerte ± SD der Peakflächen berechnet.

Nach der Identifizierung der Metaboliten wurde für jeden der identifizierten Metaboliten eine Liste repräsentativer Peaks ausgewählt (Ergänzungstabelle 1). Ihre Peakfläche für jedes Spektrum wurde erfasst und in einer Tabelle gespeichert, die dann als CSV-Datei zur statistischen Analyse auf MetaboAnalyst35 geladen wurde. Für multivariate Analysen wurden die Spektren nach der Pareto-Methode74 skaliert. Um festzustellen, ob sich Spektren in Gruppen gruppieren, wurden PCA und PLS-DA mit k-facher Kreuzvalidierung zusammen mit einer einfaktoriellen ANOVA durchgeführt, um zu sehen, welche Metaboliten sich für den spezifischen Gruppenvergleich statistisch unterschieden.

Die Signalintegrale, die den identifizierten Metaboliten entsprechen, wurden verwendet, um eine quantitative Anreicherungsanalyse unter Verwendung der MetaboAnalyst 5.035-Plattform mit der KEGG-Bibliothek durchzuführen, einer Datenbank relevanter Stoffwechselwege, die beim Menschen gefunden werden75,76,77. Signifikante Pfade waren solche mit einem p-Wert < 0,05. Die 25 am besten angereicherten Pfade wurden angezeigt.

Ein großer Teil der im Rahmen dieser Studie generierten oder analysierten Daten ist in diesem veröffentlichten Artikel und seinen ergänzenden Informationsdateien enthalten. Einige der während der aktuellen Studie verwendeten und/oder analysierten Datensätze wurden nicht einbezogen und sind auf begründete Anfrage bei den entsprechenden Autoren erhältlich.

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Kanehisa, M., Furumichi, M., Sato, Y., Ishiguro-Watanabe, M. & Tanabe, M. KEGG: Integration von Viren und Zellorganismen. Nukleinsäuren Res. 49, D545–D551 (2021).

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Wir danken Associate Professor JI Johnsen, Karolinska Institutet, für die großzügige Bereitstellung der MB-Zelllinien. Diese Forschung wurde vom Schwedischen Forschungsrat, der Schwedischen Krebsgesellschaft, dem Schwedischen Kinderkrebsfonds, Radiumhemmet Research Funds und dem Karolinska Institutet to MAH unterstützt. NMR-Experimente und -Analysen wurden im Centre for Biomolecular Spectroscopy am King's College London durchgeführt, das mit Mitteln des MRC von Wellcome und der British Heart Foundation gegründet wurde, Ref.-Nr. 202767/Z/16/Z und BHF-IG/16/2/32273. VG wurde durch ein Stipendium von Radiumhemmet, Stockholm und ARG durch eine Postdoktorandenstelle der Schwedischen Krebsgesellschaft unterstützt.

Open-Access-Förderung durch das Karolinska-Institut.

Vittoria Graziani

Aktuelle Adresse: Barts Cancer Institute, Queen Mary University of London, John Vane Science Building, Charterhouse Square, London, EC1M 6BQ, Großbritannien

Abteilung für Mikrobiologie und Tumorbiologie, Biomedicum B7, Karolinska Institutet, 171 65, Stockholm, Schweden

Vittoria Graziani, Aida Rodriguez Garcia, Lourdes Sainero Alcolado und Marie Arsenian Henriksson

Zentrum für biomolekulare Spektroskopie, King's College London, Guy's Campus, London, SE1 1UL, Großbritannien

Adrien Le Guennec

Randall Centre for Cell and Molecular Biophysics, King's College London, Guy's Campus, London, SE1 1UL, Großbritannien

Maria R. Conte

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VG, MAH und MRC haben die Studie konzipiert. VG hat die Experimente entworfen/durchgeführt und die Ergebnisse interpretiert. ARG und LSA führten die Zelltests durch. ALG führte die Metabolomik-Spektren durch und verarbeitete sie. VG und ALG führten die Metabolomics-Analyse durch. MAH und MRC überwachten die Studie. VG, MAH und MRC haben das Manuskript geschrieben und alle Autoren haben die endgültige Version bearbeitet und genehmigt.

Korrespondenz mit Marie Arsenian Henriksson oder Maria R. Conte.

Die Autoren geben an, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

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Nachdrucke und Genehmigungen

Graziani, V., Garcia, AR, Alcohol, LS et al. Stoffwechselneuverdrahtung beim MYC-gesteuerten Medulloblastom durch BET-Bromodomänen-Hemmung. Sci Rep 13, 1273 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-27375-z

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Eingegangen: 26. Juni 2022

Angenommen: 02. Januar 2023

Veröffentlicht: 23. Januar 2023

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-27375-z

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